Ki sa ki se sentèz peptides

 

Peptide sentèz se yon domèn aktif nan pwoteyin ak chimi peptide, ki tipikman enplike adisyon sekans asid amine nan yon lòd defini pou fòme chèn peptide a pa metòd chimik. Metòd sentèz prensipal yo se sentèz likid-faz ak solid-faz. Konpare ak LPPS, SPPS gen avantaj ki genyen nan pi vit, pi senp, ak mwens reyaksyon segondè, ak pi wo pwodiksyon an.

 

Metòd SPPS estanda, ki gen ladan estrateji Boc (benzyl) ak Fmoc (tBu).

 

 

Boc (benzyl) estrateji

Nan apwòch sa a sentèz, chloromethylated, hydroxymethylated polystyrène ak p-methoxybenzyl (PMA) rezin yo itilize kòm sipò solid. Gwoup la -amino pwoteje ak t-butoxicarbonyl (Boc), pandan y ap gwoup chèn bò nan asid amine yo pwoteje ak dérivés benzyl. Yo retire gwoup Boc la lè l sèvi avèk pwòp TFA oswa TFA nan CH2Cl2, epi nan fen sentèz la, gwoup pwoteksyon bò-chèn ak lyen peptide-rezin yo retire ak yon asid fò tankou asid idrofluorik anidrid (HF) oswa TFMSA.

 

Fmoc (tBu) estrateji

Nan apwòch sentèz sa a, Wang-résine, 2-Chlorotrityl Chloride Resin, Rink amide-AM résine, Rink amide-MBHA résine yo itilize kòm sipò solid.Gwoup -amino a pwoteje ak 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc ), pandan ke gwoup chèn bò nan asid amine yo pwoteje ak gwoup pwoteksyon asid-labile. Yo retire gwoup Fmoc la lè l sèvi avèk 20% piperidin nan DMF, epi nan fen sentèz la, gwoup pwoteksyon bò chèn ak lyen peptide-rezin yo retire ak 1% -95% TFA. Fmoc SPPS se kounye a metòd pi pito pou sentèz peptide.

 

Prensip debaz nan Fmoc Solid-faz Peptide Sentèz

 

Chwazi résine

Rezin ki pi lajman aplike nan Fmoc SPPS ki gen ladan 4-Alkoxybenzyl alkòl (Wang) résine, 2-Chlorotrityl chloride résine, Rink Amide Resin, Rink Amide-MBHA résine. Rezin amid yo itilize pou peptides sentèz ak amidasyon tèminal C ki nesesè. Wang résine ak 2- Cl Trt résine yo souvan itilize pou peptide sentèz ak COOH requried tèminal C gratis. Men, lè C-tèminal peptide a gen Pro ak Gly kòm premye asid amine, Wang résine pa ta dwe itilize akòz risk pou fòmasyon DKP (diketopiperazine), 2- Chlorotrityl Chloride Resin rekòmande pou itilize.

 

 

Atachman nan asid amine pwoteje ak rezin

Premye asid amine Fmoc tache ak yon résine sipò ensolubl atravè yon linker labile asid.

 

Depwoteksyon nan gwoup la -amino pwoteje

Gwoup pwoteksyon Fmoc tanporè nan N-tèminal peptidyl-rezin la retire lè w trete li ak yon solisyon 20% piperidin nan DMF. Reyaksyon sa a anjeneral fini nan 10 a 20 minit.

 

Etap lave

Apre chak reyaksyon chimik, etap lave yo fèt pou retire reyaktif depase, sous-pwodwi, ak molekil ki pa reyaji nan résine a. Sa a ede kenbe pite chèn peptide k ap grandi.

 

Aktivasyon ak kouple nan asid amine pwoteje

Se asid amine ki pwoteje ki mare ak résine a aktive pou amelyore reyaksyon li pou kouple ak pwochen asid amine nan sekans lan. Ajan aktive komen yo enkli HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU ak HATU. Coupling enplike nan fòme yon lyezon peptide ant asid amine aktive ak gwoup amine nan chèn peptide k ap grandi. Yon tès Kaiser anjeneral yo itilize pou kontwole konplè reyaksyon kouple yo.

 

Etap lave

Menm jan ak etap lave pi bonè yo, sa asire yo retire reyaktif depase ak sous-pwodwi apre reyaksyon an kouple.

 

Klivaj soti nan résine ak depwoteksyon nan gwoup pwoteje chèn bò

Yon fwa yo sentetize sekans peptide vle a sou résine a, li koupe soti nan sipò solid la lè l sèvi avèk yon bwason klivaj tankou asid trifluoroacetic (TFA) ki gen scavengers tankou thioanisol ak dlo. Ansanm, gwoup pwoteje chèn bò sou résidus asid amine yo retire, revele peptide ki konplètman depwoteje pare pou pirifikasyon ak analiz.